提高重组腺病毒载体提纯和滴定效率的研究

作者：邓祥发; 郭灵; 林丹; 曾庆堂; 磨洁琳; 韦力; 蓝玲

来源：广西医学, 2006, (01): 23-25.

• 腺病毒载体
• &beta
• -半乳糖苷酶基因
• 病毒提取
• 病毒纯化
• 空斑形成单位

目的探讨提取、纯化和滴定重组腺病毒表达载体的有效方法。方法将已用含报告基因β-半乳糖苷酶基因(LacZ)的重组5型腺病毒载体(Ad5CMVLacZ)转染的人胚肾293细胞从-70℃转移至37℃,反复冻融使细胞发生破溃,病毒从细胞内释放至上清液。在上清液中加入氯化铯,进行密度梯度超速离心,收集和透析病毒液,用空斑形成实验确定病毒的滴度。结果经提取和纯化的Ad5CMVLacZ病毒液清晰无色,用系列稀释法将其配制成10-2~10-13的稀释度,分别转染100%汇合的293细胞,连续追踪观察空斑的形成及其数目变化,直至转染后第10天,10-10稀释度的空斑数不再增加为止,计数其空斑,从而确定出mL病毒的滴度,即空斑形成单位(pfu),最终测定得到的结果是3·0×1010pfu/mL。结论用上述方法能制备出优质的重组腺病毒载体,后者足以达到对中枢神经系统损伤和疾病进行基因治疗的要求。

• 出版日期2006-1-15
• 单位广西医科大学