禽流感病毒H5N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达

作者：邹淑梅; 于在江; 张烨; 辛丽; 陈永坤; 唐启慧; 陈禹保; 陈清轩; 舒跃龙

来源：中国生物工程杂志, 2010, 30(01): 12-18.

DOI：10.13523/j.cb.20100103

• 禽流感病毒H5N1
• 血凝素
• 神经氨酸酶
• 克隆表达

目的:克隆、表达和鉴定禽流感病毒H5N1血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuram idinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法:在成功克隆禽流感病毒H5N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(49～1587bp)、pET32a(+)/NA(121～1141bp)、pGEX4T-1/HA、pGEX4T-1/NA,转化大肠杆菌BL21/rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTraP4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果:重组蛋白在大肠杆菌中可以高效达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致,蛋白纯度占总蛋白的90%以上。ELISA和Western blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论:成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1HA、NA基因序列,为禽流感病毒H5N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。

• 出版日期2010
• 单位中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所