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摘要
目的评价鞘内注射转录因子下游调控元件拮抗分子-短发夹RNA(DREAM-shRNA)对骨癌痛-吗啡耐受大鼠痛觉过敏的影响。方法健康雌性SD大鼠,体重200~230 g,进行鞘内置管术。取鞘内置管成功的大鼠60只,采用随机数字表法,将其分为5组(n=12):假手术组(S组)、骨癌痛组(P组)、骨癌痛+吗啡耐受组(PM组)、骨癌痛+吗啡耐受+空白载体组(PMB组)、骨癌痛+吗啡耐受+RNAi组(PMR组)。左胫骨上段骨髓腔注射Walker 256乳腺癌细胞5μl(1×10~5个/μl)建立大鼠骨癌痛模型。PM组、PMB组和PMR组大鼠于造模后第14~18天时皮下注射吗啡,每日单次注射剂量依次为10、20、30、40和60 mg/kg,3次/d,第19天时皮下注射吗啡3 mg/kg。造模后第20天时PM组鞘内注射生理盐水10μl,PMB组鞘内注射慢病毒空白载体5μl+生理盐水5μl,PMR组鞘内注射DREAM-shRNA 5μl+生理盐水5μl,1次/d,连续5 d。分别于造模前1 d(T_0)、造模后7 d(T_1)、14 d(T_2)、18 d(T_3)、19 d(T_4)、21 d(T_5)、25 d(T_6)和28 d(T_7)时,记录自发性缩足反射次数和后肢跛行程度评分,测定热刺激缩足反应潜伏期(PWTL)和机械刺激缩足反射阈(PWMT)。造模后第28天痛行为学测定结束后,处死大鼠,取L_4脊髓组织,观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,测定DREAM mRNA及其蛋白的表达。结果与S组比较,P组T_(2-3,5-7)时,PM组、PMV组和PMR组T_(4-6)时自发性缩足反射次数增加,后肢跛行程度评分降低,P组T_(1-3,5-7)时,PM组、PMV组和PMR组T_(1,3-7)时PWMT降低,P组、PM组、PMV组和PMR组脊髓DREAM mRNA及其蛋白表达上调(P<0.01);与P组比较,PM组和PMV组自发性缩足反射次数T_(2-3)时减少,T_4时增加,后肢跛行程度评分T_(2-3)时升高,T_4时降低,PMR组自发性缩足反射次数T_(2-376-7)时减少,T_4时增加,后肢跛行程度评分T_(2-3,6-7)时升高,T_4时降低,PM组和PMV组PWMT T_(2-3)时升高,T_(4-7)时降低,PMR组PWMT T_(2-3,6-7)时升高,T_(4-5)时降低,PM组和PMV组脊髓DREAM m...
