慢病毒介导的稳定过表达人谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基基因的WRL68细胞株构建

作者：范誉; 农清清; 廖娟; 胡新梅; 朱雪凤; 李江恒; 郭尧平; 陆继培

来源：环境与健康杂志, 2015, (10): 903-907+941.

DOI：10.16241/j.cnki.1001-5914.2015.10.017

• 慢病毒载体
• GCLC
• 过表达
• WRL68细胞 Lentiviral vector
• Glutamate-cysteine ligase catalytic subunit(GCLC)
• Overexpression
• WRL68 cell

目的利用慢病毒载体构建稳定过表达人谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)的WRL68细胞株。方法采用PCR方法合成GCLC基因全长,经Not I、Nsi I酶切后克隆到慢病毒载体LV6上;采用PCR、酶切、测序鉴定重组质粒LV6-GCLC;将重组质粒转染293T细胞,收集培养上清并感染WRL68细胞,经嘌呤霉素筛选出稳定过表达细胞株。采用增强型绿色荧光蛋白检测转染情况,采用Real-time PCR及Western blotting鉴定所构建的细胞株;MTT法检测细胞活性;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞谷胱甘肽(GSH)含量。结果 PCR、酶切及测序结果表明重组慢病毒载体构建成功;...

• 出版日期2015-10-20
• 单位广西医科大学