N-糖基化对TNFR-Fc融合蛋白结构稳定性和生物活性的影响

作者：黄嘉慧; 汪才坤; 覃锦红; 陈龙冠; 黄云娜; 谢秋玲

来源：中国生物工程杂志, 2016, 36(05): 12-19.

DOI：10.13523/j.cb.20160502

• TNFR-Fc
• 糖基化
• 去糖基化
• 蛋白质构象

目的:探究糖基化对TNFR-Fc融合蛋白结构、稳定性和生物活性的影响。方法:经N-糖酰胺酶F(PNGase F)切除TNFR-Fc融合蛋白所连的糖链,用SEC-HPLC、傅里叶变换红外光谱法和荧光光谱法等方法分析N-糖基化和去糖基化后重组蛋白的结构变化,通过加速稳定性实验和毛细管电泳检测对比其酶切前后稳定性变化,其生物活性的差异经细胞杀伤实验进行比较。结果:去糖基化后TNFR-Fc融合蛋白质分子质量略有降低,其构象、荷电性质及生物活性没有明显差异;然而切除N-糖链,TNFR-Fc二聚体的稳定性降低,蛋白质降解物明显增加。结论:去N-糖基化对TNFR-Fc的构象、荷电性质和生物活性的影响并不显著,但会影响TNFR-Fc融合蛋白的稳定性。

• 出版日期2016
• 单位暨南大学