定点突变改善β-甘露聚糖酶AuMan5A的酶学性质

作者：董运海; 胡蝶; 邬敏辰; 唐诗涵; 王春娟; 李剑芳

来源：食品与生物技术学报, 2017, 36(08): 819-825.

• β-甘露聚糖酶
• 定点突变
• 温度特性
• 比活性
• 催化效率

基于糖苷水解酶5家族(GHF5)β-甘露聚糖酶一级、三维结构的比对和分析,对宇佐美曲霉GHF5β-甘露聚糖酶AuMan5A的关键位点氨基酸实施定点突变以获得酶学性质优良的突变酶AuMan5AG320D。采用大引物PCR技术将AuMan5A基因(Auman5A)中编码Gly320的密码子GGT突变为Asp320的GAC,构建出突变酶基因Auman5AG320D。分别将Auman5A和Auman5AG320D在毕赤酵母GS115中进行了表达,分析了表达产物AuMan5A和AuMan5AG320D的酶学性质。结果表明:AuMan5AG320D的最适温度Topt由突变前的65℃提升至70℃,在70℃的半衰期t1/270由原酶的10 min延长至25 min;AuMan5AG320D的比活性由突变前的351.2 U/mg提高到1 729.1 U/mg,其催化效率(kcat/Km)是原酶的9.3倍。将Gly320突变为Asp320不仅改善了AuMan5A的温度特性,而且显著提高了该酶的比活性和催化效率。

• 出版日期2017
• 单位生物工程学院; 江南大学