抗PDL1-CAR慢病毒载体的构建及其转染培养体系的优化

作者：彭群艺; 李纯团; 郑艳; 朱雄鹏^*

来源：肿瘤预防与治疗, 2023, 36(07): 550-556.

• CART细胞
• PD-L1
• 转染
• 培养

目的：设计构建抗PDL1-CAR慢病毒载体，分析嵌合抗原受体T(chimeric antigen recptor T, CART)细胞的结构和功能，同时优化CART细胞的转染和培养，增加CART细胞的表达率和杀伤活性。方法：构建靶向程序性死亡配体1(programmed death-ligand1,PDL1)的CAR慢病毒载体，按病毒感染复数（multiplicity of infection, MOI）=10、20、40的条件进行转染，采用非磁珠法进行培养扩增，荧光显微镜和流式细胞仪检测转染后CART细胞的表达，最后采用流式绝对计数法检测CART细胞的杀伤性。结果：采用GV401质粒构建的抗PDL1-CAR慢病毒载体，经培养扩增后3组MOI的CART细胞阳性表达率分别为28.80%±0.46%、54.77%±0.32%、71.37%±0.42%，并在荧光显微镜下观察到抗PDL1-CAR细胞表达绿色荧光。在效靶比为2:1、5:1和10:1时，抗PDL1-CAR细胞比T细胞对PDL1-CA46细胞的杀伤率更高（Z=-1.964, P <0.05）。结论：构建抗PDL1-CAR慢病毒载体，可以为其他各种CART细胞的构建提供良好参考，CART细胞的表达率和杀伤活性的提高，为CART细胞的功能研究奠定基础。

• 出版日期2023
• 单位福建医科大学; 泉州市第一医院