茄病镰刀菌单克隆抗体的制备及胶体金免疫层析试纸条的研发

作者：汪琨; 赵福运; 徐云飞; 袁小凤; 赵伟春^*

来源：中国生物工程杂志, 2022, 42(07): 54-61.

DOI：10.13523/j.cb.2202053

• 浙贝母
• 根腐病
• 茄病镰刀菌
• 单克隆抗体
• 胶体金免疫层析试纸条

目的：利用浙贝母(Fritillaria thunbergii)根腐病病原菌之一的茄病镰刀菌(Fusarium solani)为抗原制备分泌特异性单克隆抗体(单抗)的细胞株，开发基于单抗的胶体金免疫层析试纸条，为检测浙贝母根腐病提供技术支撑。方法：以茄病镰刀菌全菌体蛋白质提取液为抗原，利用杂交瘤技术制备能分泌针对茄病镰刀菌特异性单抗的细胞株；间接ELISA和Western blot检测单抗的特异性、效价、灵敏度、结合蛋白等特性；采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒并标记单抗，制备胶体金免疫层析试纸条。结果：获得3株能分泌针对茄病镰刀菌的特异性单抗的细胞株，分别命名为FsA3、FsG6、FsD4。其中FsA3检测灵敏度为24.41 ng/mL,FsG6、FsD4检测灵敏度均为12.21 ng/mL。FsA3、FsG6、FsD4均针对茄病镰刀菌强烈反应，且不与细极链格孢(Alternaria tenuissima)、交链格孢(A.alternata)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、木贼镰刀菌(F.equiseti)、变红镰刀菌(F.incarnatum)、尖孢镰刀菌(F.oxysporum)、茎点霉属真菌(Phoma sp.)、Phomopsis oblonga等抗原发生交叉反应。基于FsG6的胶体金免疫层析试纸条检测浙贝母无菌组培苗提取液时只出现质控线，加入100 ng茄病镰刀菌抗原或浙贝母根腐病病株样品时，均出现肉眼可见的质控线和检测线。结论：制备的单抗和试纸条具有简单、快速、特异性和灵敏度高的优点，可用于检测浙贝母病株中分离到的茄病镰刀菌，这为浙贝母根腐病田间快速准确检测提供了技术支撑。

• 出版日期2022
• 单位生命科学学院; 浙江中医药大学