骨桥蛋白剪接变体对胶质瘤细胞侵袭性的影响

作者：钱春发; 颜伟; 赵鹏; 张军霞; 李瑞; 石磊; 孙关; 孙利华; 钱进; 傅震; 刘宁; 尤永平

来源：中国现代神经疾病杂志, 2009, 9(06): 562-570.

DOI：10.3969/j.issn.1672-6731.2009.06.010

• 骨桥蛋白质
• 剪接体
• 脑肿瘤
• 神经胶质瘤
• 聚合酶链反应
• 衔接蛋白质类,信号转导

目的探讨骨桥蛋白(OPN)剪接变体对胶质瘤细胞侵袭性的影响及其作用机制。方法采用荧光定量聚合酶链反应或逆转录-聚合酶链反应分别检测正常脑组织、WHOⅡ～Ⅳ级胶质瘤组织,以及人胶质瘤细胞系U251、U87、SHG44和TJ905骨桥蛋白各剪接变体表达水平;小干扰RNA(siRNA)技术沉默野生型骨桥蛋白,慢病毒质粒表达载体分别导入三种突变型剪接变体OPN-a、OPN-b和OPN-c;细胞体外侵袭实验检测U251和U87细胞体外侵袭力。整合素α_vβ_3受体抗体和磷脂酰肌醇3-激酶(PI_3K)抑制剂LY294002抑制骨桥蛋白的作用,阻断PI_3K/Akt信号转导通路。Western blotting法检测侵袭相关蛋白尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平,以及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT磷酸化水平和核因子-κB(NF-κB)p65转录进入细胞核水平,明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9活性。结果 WHOⅢ～Ⅳ级胶质瘤组织,以及U251和U87细胞骨桥蛋白各剪接变体呈高表达,而正常脑组织、WHOⅡ级胶质瘤组织及SHG44和TJ905细胞呈低表达。OPN-a和OPN-c可升高U251和U87细胞AKT磷酸化水平,诱导NF-κB p65转录进入细胞核,提高uPA、MMP-2和MMP-9表达水平,增强MMP-2和MMP-9活性,从而增强胶质瘤细胞侵袭力;OPN-b对胶质瘤细胞侵袭力无明显作用。结论 OPN-a和OPN-c通过激活PI_3K/Akt/NF-κB信号转导通路而增强胶质瘤细胞侵袭力。

• 出版日期2009
• 单位南京医科大学第一附属医院