柯萨奇病毒A组10型免疫荧光检测方法的建立及其在灭活验证中的应用

作者：张宇昊; 杨婷; 李华; 岳磊; 向虹; 谢天宏; 张也; 谢忠平^*

来源：中国病毒病杂志, 2023, 13(01): 48-54.

DOI：10.16505/j.2095-0136.2023.0006

• 柯萨奇病毒A组10型
• 灭活验证
• 免疫荧光检测
• 敏感性

目的 建立检测柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CVA10)病毒颗粒的免疫荧光检测方法，使用该方法对病毒的灭活进行辅助验证。方法 在非洲绿猴肾细胞(African green monkey kidney cell,Vero)、人恶性胚胎横纹肌瘤细胞(human malignant embryonic rhabdomyoma cells,RD)、非洲绿猴胚胎肾细胞(African green monkey embryonic kidney cells,MA104)三种细胞上检测病毒滴度，绘制滴度曲线确定最敏感细胞；以兔抗CVA10多克隆抗体为一抗、Alexa Fluor? 594偶联的山羊抗兔IgG为荧光二抗，对实验条件进行优化，建立检测CVA10的免疫荧光方法，并与灭活验证中细胞盲传实验结果进行比较。结果 RD细胞为CVA10最敏感细胞，一抗最佳稀释度为1∶100，二抗最佳稀释度为1∶200。病毒感染RD细胞后24 h可检测到的病毒量下限为50 CCID50/ml，感染4 d时的检测下限为0.5 CCID50/ml。Vero细胞为CVA10的较敏感细胞，相同条件下，病毒感染Vero细胞后24 h可检测到的病毒下限为80 CCID50/ml,5 d时的检测下限为1 CCID50/ml。灭活验证中，免疫荧光结果与细胞盲传实验结果具有一致性。结论 成功建立了CVA10的免疫荧光检测方法，该方法可辅助细胞盲传实验进行灭活验证。

• 出版日期2023
• 单位中国医学科学院医学生物学研究所