敲低CircCDR1as在糖皮质激素诱导的骨微血管内皮细胞活性及血管生成中的作用研究

作者：艾克热木江·阿尔肯; 日夏提·帕尔哈提; 张峥; 翟生^*

来源：河北医学, 2022, 28(12): 1937-1943.

• 小脑变性相关蛋白1反义转录物
• 股骨头坏死
• 骨微血管内皮细胞
• 糖皮质激素
• 血管生成

目的:探究敲低环状RNA小脑变性相关蛋白1反义转录物(Circular RNAantisense to the cerebellar degeneration related protein 1 transcript, circCDR1as)对糖皮质激素诱导的人股骨头骨微血管内皮细胞(bone microvascular endothelial cells, BMECs)活性及血管生成的影响。方法:收集糖皮质激素诱导的股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head, ONFH)患者股骨头组织，HE染色观察组织病理学特征，实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测CircCDR1as表达变化；获取全髋关节置换术患者的无病变股骨头，分离与培养BMECs,通过流式细胞术检测细胞表面标记物CD31、CD34、CD45、CD54、CD144和CD117表达与细胞免疫荧光染色检测CD31与vWF表达来鉴定BMECs;实验分组包括对照组、GC组、shNC+GC组和shCDR1as+GC组，通过糖皮质激素氢化可的松处理细胞以及shCDR1as、shNC转染细胞进行对应处理，qRT-PCR检测CircCDR1as表达变化，MTT法和EdU染色检测细胞增殖水平，体外成管实验观察细胞管腔形成情况，Western blot测定血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)与血管内皮细胞因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2)的蛋白表达。结果:ONFH患者股骨头组织内骨髓坏死并有空骨腔出现，CircCDR1as相对表达量显著高于对照组(P<0.05);观察到分离的细胞生长状态良好，CD31、CD54和CD144均呈阳性表达，CD34、CD45和CD117均呈阴性表达，细胞内CD31与vWF的免疫荧光表达明显，由此说明成功分离到BMECs;与对照组比较，GC组CircCDR1as相对表达量上调，细胞增殖活性下降，EdU阳性细胞率降低，细胞形成的管腔数目减少，VEGF与VEGFR-2蛋白相对表达量下调，差异均具有统计学意义(P<0.05);与shNC+GC组比较，shCDR1as+GC组CircCDR1as相对表达量下调，细胞增殖活性与EdU阳性细胞率均升高，细胞形成的管腔数目增加，同时，VEGF与VEGFR-2蛋白相对表达量上调，差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:患者股骨头坏死组织内CircCDR1as高表达，敲低CircCDR1as能够在体外抑制糖皮质激素诱导的BMECs活性下降，促进血管生成，从而对BMECs起到保护作用。

• 出版日期2022
• 单位新疆医科大学第五附属医院