慢病毒介导的RNA干扰对小鼠胰腺星状细胞中半乳糖凝集素-1基因沉默效应的研究

作者：袁中旭; 汤东; 陆子鹏; 卫积书; 张静静; 蒋奎荣; 苗毅

来源：外科理论与实践, 2011, 16(05): 455-460.

DOI：10.16139/j.1007-9610.2011.05.017

• 胰腺星状细胞
• 半乳糖凝集素-1
• 慢病毒
• RNA干扰

目的:评价慢病毒介导的RNA干扰技术对小鼠胰腺星状细胞(mPSC)中半乳糖凝集素-1(galectin-1)基因的沉默效应,并观察其对mPSC增殖的影响。方法:设计并合成3条galectin-1基因特异性RNAi靶序列,构建到慢病毒PLKO.1-PURO载体中。从慢病毒包装转染的293T细胞,获得病毒上清感染的mPSC;采用嘌呤霉素(2μg/μL)筛选出慢病毒感染成功的mPSC。实时荧光定量RT-PCR和Western印迹法检测mPSC中galectin-1 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测mPSC的增值能力。结果:PCR扩增和测序表明成功构建galectin-1慢病毒干扰载体,可以有效沉默mPSC中galectin-1基因的表达。构建的RNAi慢病毒载体感染mPSC后galectin-1 mRNA表达量同对照组比较,分别为(19.4±4.8)%、(6.2±4.3)%、(27.6±5.7)%,galectin-1蛋白表达量同对照组比较分别为(25.9±3.6)%、(10.8±4.1)%、(30.2±3.2)%。稳定的galectin-1沉默mPSC在第4天细胞增殖能力下降(22.9±2.7)%(P<0.01)。结论:构建的galectin-1 RNAi慢病毒载体能显著降低mPSC中galectin-1的表达量,galectin-1沉默后mPSC增殖能力下降。

• 出版日期2011
• 单位南京医科大学第一附属医院