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摘要
目的 初步探索SjGPR89在日本血吸虫的生长发育中的作用。方法 利用SMART网站和TMHMM网站预测其SjGPR89蛋白的蛋白结构和跨膜结构。40只SPF级6～8周龄雌性昆明小鼠经腹部贴片法感染尾蚴（200±10）条/鼠,分别于感染后第14、16、18、20、22、24、26、28、30天解剖小鼠,收集虫体,提取虫体RNA并逆转录为cDNA,采用qRT-PCR检测SjGPR89 mRNA在血吸虫中的转录水平。取12只SPF级6～8周龄雌性昆明小鼠,经腹部贴片法感染尾蚴（60±2）条/鼠,随机平均分为SjGPR89干扰组（干扰组）和对照组,干扰组于感染后第1、6、10、14、18、22、26天经尾静脉注射SjGPR89双链RNA （dsRNA） 10μg/鼠,对照组注射等量绿荧光蛋白（GFP） dsRNA。小鼠感染后第30天,采用肝门静脉灌注法收集虫体,取雌、雄虫各5条,采用qRT-PCR检测虫体SjGPR89 mRNA相对转录水平差异;用多聚甲醛乙酸乙醇（AFA）固定分开的雌、雄虫后,采用Image J软件对虫长进行测量,并统计虫荷;采用卡红染色对雌、雄虫的性腺进行染色,荧光显微镜下观察日本血吸虫生殖腺发育状态的变化。另取12只SPF级6～8周龄雌性昆明小鼠,经腹部贴片法感染尾蚴（40±2）条/鼠,随机平均分为干扰组和对照组,干扰组于小鼠感染后第26、30、34、38天经尾静脉注射10μg dsRNA/鼠,于第42天解剖小鼠,取肝脏组织,qRT-PCR检测肝脏组织中胶原Ⅰ（CollagenⅠ）、胶原Ⅲ（CollagenⅢ）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA） mRNA的相对转录水平;肝脏组织经5%NaOH消化后,计数虫卵;制备肝脏切片,Masson染色后镜下观察肝纤维化程度。结果 TMHMM网站预测结果显示,SjGPR89为一种较保守的9次跨膜的G蛋白偶联受体;SMART网站预测结果显示,SjGPR89蛋白由4个跨膜区域、1个高尔基pH调节受体（GPHR）结构域、1个低复杂度区域、和一个脱落酸（ABA） G蛋白偶联受体（GPCR）结构域组成。qRT-PCR检测结果显示,小鼠体内不同发育时期（14～30 d）的日本血吸虫的SjGPR89 mRNA转录水平较平稳,仅雌虫在感染小鼠后的第26～28天有大幅上升。感染后第30天,qRT-PCR检测结果显示,干扰组血吸虫雌、雄虫中SjGPR89的mRNA相对转录水平分别为307.70±58.21、97.88±11.38,较对照组的767.10±142.79、182.02±7.42 （t=5.96、12.39,P＜0.01）敲低了59.89%、46.23%;干扰组雌、雄虫的虫长分别为（12.13±2.67）、（10.00±1.72） mm,较对照组的（13.67±1.74）、（11.48±1.94） mm （t=4.10、5.09,P ＜0.01）减短了11.22%、12.93%;干扰组雌、雄虫的虫荷数分别为23.00±1.83、23.75±2.99,较对照组的26.75±0.96、31.00±3.56 （t=3.64、3.12,P＜0.05）减少了14.02%、23.39%。卡红染色结果显示,干扰组雌虫的性腺出现延滞状态,卵巢和卵黄腺着色较浅,且卵巢的面积远小于对照组;雄虫的性腺发育不充分,形态大小较对照组小。干扰组的每克肝脏虫卵数为（2 777.33±197.94）个,较对照组的（5 871.32±875.25）个（t=5.97,P＜0.01）减少了52.70%。感染后第42天,Masson染色观察结果显示,干扰组小鼠肝脏胶原纤维面积小于对照组;qRT-PCR检测结果显示,干扰组小鼠肝脏组织中的CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA相对转录水平分别为530.20±246.81、825.26±139.82、551.59±189.94,均低于对照组（t=3.81、2.50、4.72,P＜0.05）。结论 干扰日本血吸虫SjGPR89蛋白可抑制日本血吸虫的生长发育、生存能力和雌虫产卵,同时也极大地减轻了宿主的肝脏病理损伤。
- 出版日期2022-11-24
- 单位内蒙古大学; 生命科学学院; 复旦大学; 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所
