红光熊蜂蜂毒蛋白酶的基因克隆和表达

作者：鲁炜; 李光植; 王东; 崔征; 陈炳来

来源：沈阳药科大学学报, 2009, (01): 69-73.

• 红光熊蜂
• 蜂毒蛋白酶
• 克隆
• 表达
• 杆状病毒

目的克隆表达序列标签(ESTs)中筛选出的红光熊蜂蜂毒蛋白酶(BiVP)基因,在草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞Sf-9中进行表达。方法利用ESTs从红光熊蜂cDNA文库中获得BiVP基因,以PCR技术扩增出BiVP的完整cDNA,并构建病毒表达载体PBac1-BiVP,通过昆虫杆状病毒表达系统,在Sf-9昆虫细胞中进行表达,表达产物用快速蛋白液相色谱(FPLC)系统进行纯化。结果成功克隆BiVP基因并在Sf-9昆虫细胞中得到表达,表达产物纯化后经SDS-PAGE检查为单一条带。结论首次在红光熊蜂中克隆到蜂毒蛋白酶基因,在昆虫杆状病毒表达系统中进行了表达,并对表达产物进行了纯化,为深入研究BiVP的生物活性奠定了基础。

• 出版日期2009-1-20
• 单位沈阳药科大学