敲低3-磷酸甘油酸脱氢酶靶向能量代谢逆转骨肉瘤恶性生物学的行为

作者：周红; 康权; 谢圣男; 陈洁; 石雨鹭; 罗庆^*

来源：解剖学报, 2022, 53(04): 488-497.

DOI：10.16098/j.issn.0529-1356.2022.04.012

• 3-磷酸甘油酸脱氢酶
• 能量代谢
• 骨肉瘤
• 成骨分化
• 实时定量聚合酶链反应
• 人

目的 探讨敲低3-磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)靶向能量代谢对人骨肉瘤143B细胞恶性生物学行为及成骨分化的影响。方法 Real-time PCR及Western blotting检测PHGDH在成骨细胞hFOB1.19和不同恶性程度骨肉瘤细胞TE85、MG63、143B中的表达。采用脂质体转染法将短发夹RNA(shRNA)-PHGDH重组质粒转染至143B细胞中，Real-time PCR和Western blotting检测PHGDH的表达变化；结晶紫染色法、细胞计数法、CCK-8实验检测细胞增殖；划痕实验检测细胞平行迁移能力，Transwell实验检测细胞垂直迁移及侵袭能力；Annexin V-FITC/PI双染法、DAPI染色法检测细胞凋亡；碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红S染色检测成骨分化作用，Western blotting检测成骨分化指标Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OC)的表达情况；Real-time PCR检测能量代谢相关基因葡萄糖转运蛋白1((GLUT1)、6-磷酸果糖激酶1(PFK1)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)的表达，乳酸检测试剂盒测定乳酸分泌量，三磷酸腺苷(ATP)检测试剂盒检测ATP产生量。结果 PHGDH在143B细胞中的表达明显高于在hFOB1.19、MG63和TE85细胞中(P<0.01);转染shRNA-PHGDH重组质粒使143B细胞中的PHGDH表达量降低(P<0.01)、增殖能力降低(P<0.01)、细胞迁移及侵袭能力减低(P<0.01)、凋亡率增高(P<0.01)、ALP染色阳性率增加(P<0.01)、茜素红染色阳性率增加(P<0.05)、Runx2(P<0.05)和OC的表达增高(P<0.01)、能量代谢相关基因(GLUT1、PFK1、PKM2、LDHA)的表达下调(P<0.01)、乳酸减少(P<0.01)、ATP增多(P<0.05)。结论 敲低PHGDH可通过能量代谢抑制人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移、侵袭，促进其凋亡，并促进其成骨分化。

• 出版日期2022
• 单位重庆医科大学附属儿童医院