羧酸酯酶A2在大肠杆菌中的表达及特征分析

作者：黄菁乔传令赵乔王鹏

来源：实验生物学报, 2002, (02): 77-81.

• 羧酸酯酶A2
• 克隆
• 表达
• 动力学参数 Carboxylesterase A2. Cloning. Expression. Kinetic constants

本研究采用RT-PCR法从抗性蚊虫(Culex quinquefasciatus)中克隆了羧酸酯酶A2的全长cDNA,对其进行了序列测定,并构建了融合表达质粒pET-ESTA2。转化大肠杆菌BL21后,在异丙基硫代牛乳糖苷(IPTG)的诱导下,使羧酸酯酶A2在大肠杆菌内得到表达。表达产物经亲和层析纯化获得了1条带的重组蛋白。与报道的从蚊虫体内纯化的羧酸酯酶相比,从表达产物中纯化的羧酸酯酶Km与其一致,但从表达产物纯化的羧酸酯酶的Vm比蚊虫中纯化的羧酸酯酶的Vm高。表明用亲和层析纯化的羧酸酯酶A2比从蚊虫中提取的纯度高。羧酸酯酶A2表达纯化及特征分析为其应用奠定了基础。

• 出版日期2002
• 单位中国科学院动物研究所; 中国农业大学