土壤镰刀菌种群检测的巢式PCR-DGGE方法的建立

作者：程晓亮; 纪莉景; 王连生; 栗秋生; 朱杰华; 孔令晓

来源：河北农业大学学报, 2010, (04): 89-93.

• 土壤微生物
• 镰刀菌
• PCR-DGGE
• 优化 soil microorganism
• Fusarium
• PCR-DGGE
• optimization

本试验比较了4种提取小麦-玉米轮作免耕田土壤DNA的方法,并对巢式PCR反应体系和扩增条件进行了优化,建立了适合检测土壤中镰刀菌多样性的PCR-DGGE体系。结果表明:土壤DNA的质量是影响PCR扩增结果的关键因子,试剂盒Fast DNA SPINfor Soil所提土壤DNA片段接近23 bp,A260/A280比值为1.84,DNA产量为18.1μg/g,更适合进行PCR反应。DNA模板的浓度决定PCR扩增结果,第一轮PCR扩增的DNA模板适宜量为2～5 ng,以第一轮PCR产物的原液为模板进行第二轮PCR扩增,在退火温度为67℃时扩增结果最好。PCR产物在变性范围为45%～60%的丙烯酰...

• 出版日期2010
• 单位河北农业大学; 河北省农林科学院植物保护研究所