蛋白内含子介导纯化的表达载体的构建及应用

作者：张云龙; 张众; 王飞; 陈毓荃; 黄华樑

来源：生物技术, 2004, (04): 13-16.

• 单链抗体
• intein
• CBD
• FkpA
• pTWIN
• 纯化

将抗膀胱癌单链抗体 (PG)融合在蛋白内含子 (intein)的C末端 ,利用intein的N末端具有的chitinbindingdomain(CBD)对几丁质柱的吸附特性及intein的自切割活性对PG进行一次性纯化。同时 ,引入大肠杆菌分子伴侣肽基脯氨酰顺反异构酶 (Fk pA)与目的蛋白进行共表达及融合表达 ,以使目的蛋白以可溶形式存在。结果显示 ,PG融合蛋白对几丁质柱的吸附效率很高 ,in tein的自切割释放PG的效率也较高 ,但PG仅出现在SDS洗脱液中。FkpA与PG共表达能显著地提高目的蛋白的可溶性。Intein介导的纯化系统前景远大。

• 出版日期2004-8-20
• 单位中国科学院遗传与发育生物学研究所; 西北农林科技大学