大肠杆菌O157∶H7微滴数字PCR定量方法的建立

作者：董莲华; 张玲; 姜君; 王江南; 王晶; 陈唯军

来源：分析化学, 2015, (03): 319-324.

• 微滴数字聚合酶链式反应
• 大肠杆菌O157∶H7
• 拷贝数 Droplet digital polymerase chain reaction
• Escherichia coli O157∶ H7
• Copy number

以大肠杆菌O157∶H7(E.coli O157∶H7)rfb E基因为靶基因,建立了可对其准确定量的微滴数字PCR(dd PCR)方法。对dd PCR反应中的探针浓度进行了优化,考察了方法的线性范围、精密度、定量限和检出限。最终确定dd PCR反应中的最佳探针浓度为300 nmol/L。E.coli O157∶H7基因组DNA浓度范围为4~1.25×105拷贝/20μL dd PCR反应液时,dd PCR方法线性相关系数(R2)为0.999。当DNA浓度为760~88400拷贝/20μL时,方法的精密度最好(RSD<5%)。本方法的定量限为4拷贝/20μL,检出限为3拷贝/20μL。特异性验...

• 出版日期2015
• 单位中国科学院北京基因组研究所; 北京市计量检测科学研究院; 中国计量科学研究院