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摘要
本研究通过SDS法从香蕉幼嫩叶片中提取基因组DNA,通过PCR的方法对ACS启动子2.5Kb的序列进行缺失改造,克隆到了长1185bp的ACS启动子片段,与GenBank报道序列相比较同源性为93.2%。经PlantCARE软件分析发现序列中含有多种调控元件,经预测ACS启动子可能被光、热、GA、乙烯或伤所诱导。为验证其果实特异表达活性,通过插入到pBI101.2中间表达载体上的GUS基因5'端前,构建了含GUS基因的瞬时表达载体pBACS。用基因枪法将pBACS转化到香蕉果实中,结果表明:用pBACS包被的金粉轰击的果实经GUS组织化学染色后,都出现兰色斑点,对照没有出现兰色斑点。因此认为GUS基因在香蕉果实成功实现瞬时表达。同时,通过改进的酚-氯仿提取法从乙肝病毒感染者的血清中提取总DNA,然后根据报道的序列设计特异性引物,同时在上游引物中引入了Kozak序列,经PCR克隆到HBsAg基因序列,长度为681bp。NCBIBLAST分析的结果表明,获得的HBsAg基因序列及推导的氨基酸序列与GenBank中所报道的序列的同源率分别为97.2%和97.4%。将经过改造的HBsAg基因替代pBACS中的GUS基因,成功构建了含有ACS启动子和HBsAg基因的香蕉树果实表达载体,为下一步转化香蕉,获得在果实中表达HBsAg蛋白的转基因植株奠定了基础。
- 出版日期2005
- 单位中国热带农业科学院热带生物技术研究所
