登革2型病毒全长cDNA克隆定点诱变的OL-PCR方法

作者：赵卫; 胡志君; 杨佩英; 秦鄂德; 于曼; 陈水平; 王鹏程; 耿丽卿; 范宝昌

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2001, (06): 82-85.

• 登革2型病毒
• cDNA克隆
• 定点诱变
• OL-PCR

目的　对带有登革 2型病毒 (DEN 2 )全长cDNA的质粒pDVWS5 0 1上E6 2、E2 0 3位点进行定点诱变。方法　设计 4对点诱变引物 ,运用OL PCR(overlapPCR)法 ,扩增出分别在E6 2或E2 0 3位带有点突变的 2条DNA片段 ,克隆至T载体 ,获T TB6 2、T TB2 0 3两个克隆。将T TB6 2用ClaⅠ和SphⅠ分别酶切 ,T TB2 0 3用SphⅠ +NheⅠ酶切后 ,用T4连接酶分别连接至pDVWS5 0 1,获重组质粒TB6 2和TB2 0 3。对TB6 2和TB2 0 3进行序列测定。结果　成功得到分别在E6 2、E2 0 3位带有点突变的TB6 2、TB2 0 3克隆。结论　OL PCR法是具有较高突变效率的定点诱变方法

• 出版日期2001-11-30
• 单位中国人民解放军军事医学科学院