颗粒溶素和穿孔素真核共表达及其对A549细胞的影响

作者：王晚霞; 兰喜; 徐向红; 居军; 柳纪省

来源：中国生物工程杂志, 2009, (10): 12-17.

DOI：10.13523/j.cb.20091003

• 颗粒溶素
• 穿孔素
• 人肺癌A549细胞
• FMDV2A Granulysin Perforin Lung neoplasms FMDV2A

目的:克隆人颗粒溶素和穿孔素基因并构建真核表达载体pGNLY-2A-PFP,观察其在人肺癌A549细胞中的表达情况。方法:体外分离培养外周血单个核细胞并抽提总RNA,RT-PCR扩增人颗粒溶素和穿孔素的基因片段,并将其分别插入pMD18-T进行测序,鉴定正确后构建pIRES-GNLY、pIRES-PFP及pGNLY-2A-PFP并转染人肺癌A549细胞,RT-PCR和间接免疫荧光检测目的蛋白表达,流式细胞Annexin V/PI检测转染后细胞凋亡情况。结果:成功获取了人颗粒溶素和穿孔素cDNA,构建了真核表达载体pIRES-GNLY、pIRES-PFP、pGNLY-2A-PFP,转染A549细...

• 出版日期2009
• 单位家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 农业部; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 甘肃省人民医院