EB病毒潜伏膜蛋白1胞外区融合蛋白的表达及纯化

作者：张大为; 朱进; 陈仁杰; 冯振卿

来源：南京医科大学学报(自然科学版), 2008, 28(04): 420-423.

DOI：10.3969/j.issn.1007-4368.2008.04.004

• 鼻咽癌
• EB病毒
• LMP1
• 胞外区
• 重组基因

目的:在大肠杆菌中表达EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)胞外肽段与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白,并用该融合表达蛋白检测EB病毒相关鼻咽癌(NPC)患者血清中的特异性抗体。方法:用BamHⅠ和EcoRⅠ将含LMP1胞外区重组基因的质粒pMD18-LMP1双酶切后,克隆到pGEX-4T-2中。重组质粒经酶切鉴定、核酸序列分析后转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,表达的蛋白经谷胱甘肽S-转移酶柱亲和层析纯化,纯化的蛋白经Westernblot法检测鉴定。结果:重组表达质粒经酶切鉴定为阳性,核酸序列分析正确。SDS-PAGE和Western blot结果显示表达的重组蛋白分子质量约为32.2ku,此抗原能够与鼻咽癌患者血清中抗体特异性结合。结论:成功获得了LMP1胞外区重组基因表达的蛋白,并证明原核表达的LMP1胞外肽段保持了原有的抗原性,能够与EBV相关鼻咽癌患者血清中的抗体特异性结合。

• 出版日期2008-4-15
• 单位中国人民解放军南京军区军事医学研究所; 南京医科大学; 南京医科大学第二附属医院