PDCD4表达下调通过pAKT/pGSK3β途径促进胃癌顺铂耐药的机制初探

作者：柳丹; 汤志明; 武福云; 赵红艳; 柯镜; 向鹏; 金佳晴; 李珊^*

来源：天津医药, 2019, 47(05): 454-458.

• 顺铂
• 抗药性,肿瘤
• 胃肿瘤
• 程序性细胞凋亡因子4
• 蛋白激酶B
• 糖原合成酶激酶3β

目的探讨程序性细胞凋亡因子4(PDCD4)表达下调在顺铂诱导胃癌细胞凋亡中的作用机制,为胃癌的顺铂耐药提供新的分子靶点。方法通过在人胃癌细胞系SGC7901中敲减表达PDCD4基因,顺铂诱导细胞凋亡,将细胞分为shNC组、shPDCD4组、shNC加药组和shPDCD4加药组,荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测PDCD4 mRNA表达水平;Caspase-3活性测定试剂盒、Hoechst染色结合细胞免疫荧光检测细胞凋亡水平;Western blot检测磷酸化蛋白激酶B(pAKT)和磷酸化糖原合成酶激酶3β(pGSK3β)蛋白表达水平。在细胞中加入特异性Akt抑制剂,将细胞分为shNC加药组、shPDCD4加药组、LY294002阻断组(转染shPDCD4质粒,先加LY294002再加入顺铂处理)和Wortmannin阻断组(转染shPDCD4质粒,先加Wortmannin再加入顺铂处理),Western blot检测聚ADP-核糖聚合酶(PARP)蛋白表达水平。结果 qRT-PCR和Western blot检测结果证实稳定转染ShPDCD4质粒的SGC7901细胞中PDCD4的mRNA表达和蛋白表达均有显著下降,体外稳定转染ShPDCD4的SGC7901胃癌细胞株构建成功。相较于shNC加药组,shPDCD4加药组Caspase3活性下降,细胞凋亡降低(P<0.05)。PDCD4表达下调将导致pAKT和pGSK3β的表达水平提高(P<0.05),应用Akt抑制剂(LY294002、Wortmannin)阻断该信号通路后,PARP的相对表达水平重新上调(P<0.05)。结论 PDCD4表达下调能够通过pAKT/pGSK3β途径降低顺铂引起的胃癌细胞凋亡,进而促进细胞顺铂耐药的形成。

• 单位
  武汉市第八医院; 湖北医药学院; 射阳县人民医院