敲减circ0001879对高糖作用的肾小管上皮细胞HK-2损伤的影响机制研究

作者：荆立宝; 白丽^*

来源：国际免疫学杂志, 2023, 46(01).

• 肾小管上皮细胞
• circ0001879
• miR-136
• 细胞凋亡
• 氧化应激

目的探讨circ0001879对高糖作用的肾小管上皮细胞HK-2凋亡和氧化应激的影响及作用机制。方法体外培养HK-2细胞, 转染后用30 mmol/L葡萄糖干预24 h。未转染的HK-2细胞分为对照组(NG组)和高糖组(HG组);转染后的HK-2细胞分为HG+si-NC组、HG+si-circ0001879组、HG+miR-136组、HG+miR-NC组、HG+si-circ0001879+anti-miR-NC组和HG+si-circ0001879+anti-miR-136组。流式细胞术检测细胞凋亡, Western blot检测兔抗人B淋巴细胞瘤-2(B lymphocytoma-2, Bcl-2)和兔抗人Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X, Bax)表达, 硫代巴比妥酸法检测丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量, 黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性。反转录实时荧光定量PCR(reverse transcription-real time quantitative PCR, RT-qPCR)检测circ0001879和miR-136表达, 双荧光素酶报告基因实验验证circ0001879与miR-136靶向关系。结果 HK-2细胞经高糖处理后, 与NG组相比, HG组、HG+si-NC组和HG+si-circ0001879组circ0001879含量、HK-2细胞凋亡率、Bax表达及MDA含量明显升高, 而miR-136含量、相关蛋白Bcl-2表达及SOD活性明显降低, 差异具有统计学意义(F值分别为1036.48、181.50、191.80、380.29、1396.44、195.18、108.17, P值均<0.001);敲减circ0001879后, 与HG组、HG+si-NC组比较, HG+si-circ0001879组circ0001879含量、HK-2细胞凋亡率、Bax表达、MDA含量明显降低, 而miR-136含量、Bcl-2表达、SOD活性明显升高, 差异具有统计学意义{ [(4.40±0.12)、(4.48±0.14)]比(1.44±0.08), [(24.89±1.43) %、(24.93±1.56)%]比(12.53±0.61)%, [(0.76±0.05)、(0.76±0.06)]比(0.27±0.02), [(621.27±23.75) nmol/mL、(626.98±15.24)nmol/mL]比(309.48±15.24) nmol/mL, [ (0.12±0.01)、(0.12±0.01)]比(0.80±0.04), [(0.12±0.01)、(0.13±0.01)]比(0.54±0.05), [(94.00±5.59) U/L、(92.64±7.92)U/L]比(215.69±10.88)U/L, P<0.05 }。Circular RNA Interactome靶基因在线预测软件显示, miR-136的核苷酸序列与circ0001879存在结合位点。双荧光素酶报告基因研究结果表明, miR-136可明显降低WT-circ0001879的荧光素酶活性(t=8.23, P<0.05)。过表达miR-136后, 与HG+miR-NC组相比, HG+miR-136组MDA含量、HK-2细胞凋亡率、Bax表达明显降低, 而SOD活性、miR-136含量、Bcl-2表达明显升高, 差异有统计学意义[(630.89±23.31)nmol/mL比(266.84±10.39)nmol/mL , (25.04±1.51)%比(9.67±0.57)%, (0.76±0.06)比(0.19±0.02), (95.23±4.60) U/L比(225.20±11.36)U/L, (0.12±0.01)比(0.89±0.05), (0.12±0.01)比(0.60±0.06), t值分别为24.71、16.50、15.61、18.37、26.16、13.67, P值均<0.001]。敲减miR-136后, 与HG+si-circ0001879+anti-miR-NC组比较, HG+si-circ0001879+anti -miR-136组MDA含量、HK-2细胞凋亡率、Bax蛋白表达显著升高, 而SOD活性、miR-136含量、Bcl-2表达显著降低, 差异具有统计学学意义[(310.14±9.31)nmol/mL比(591.46±20.22)nmol/mL, (12.63±0.65)%比(21.57±1.15%)%, (0.26±0.02)比(0.62±0.07), (221.22±13.28) U/L比(118.10±6.88)U/L, (0.80±0.05)比(0.23±0.02), (0.55±0.05)比(0.21±0.02), t值分别为21.89、11.72、8.57、11.94、18.33、10.94, P值均<0.001]。结论敲减circ0001879可通过负调控miR-136来抑制高糖处理的肾小管上皮细胞HK-2凋亡和氧化应激。

• 出版日期2023
• 单位青岛市妇女儿童医院; 青岛市城阳区第二人民医院