单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)对蛋白酶体α7亚基(PSMA7)蛋白稳定性的影响

作者：张萍萍; 王鹏皓; 曹源; 魏从文; 何湘; 钟辉; 胡成进

来源：军事医学, 2016, 40(05): 392-395.

• 单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)
• 蛋白酶体α7亚基(PSMA7)
• 蛋白酶体
• 稳定性

目的研究单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)对蛋白酶体α7亚基(PSMA7)蛋白稳定性的影响。方法通过重组PCR方法将663位天冬氨酸突变为丙氨酸,构建Mps1激酶活性缺失的突变体(pc DNA3-Flag-Mps1KD),并通过免疫印迹实验检测其是否能成功表达。采用免疫印迹实验检测Mps1及Mps1KD对PSMA7蛋白稳定性的影响;通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测Mps1及Mps1KD对PSMA7 RNA表达水平的影响。结果免疫印迹结果证实构建的突变质粒Mps1KD能正确表达且野生型Mps1可明显增强PSMA7稳定性,而Mps1KD则不能;加入Mps1激酶活性抑制剂后,降低PSMA7稳定性;RT-PCR检测结果发现Mps1及Mps1KD对PSMA7 RNA表达水平无影响。结论成功构建了Mps1激酶活性缺失突变体真核表达质粒pc DNA3-Flag-Mps1KD,并在293T细胞中得到了表达;研究还发现Mps1通过其激酶活性可增强PSMA7蛋白稳定性,但对其RNA表达水平无影响,为进一步研究Mps1对蛋白酶体功能影响及对肿瘤发生发展奠定基础。

• 出版日期2016
• 单位中国人民解放军济南军区总医院; 军事医学科学院; 锦州医科大学