SOD2启动子的克隆及转录活性的检测

作者：张秀娟; 王娟; 刘铮; 王达安; 刘芸; 姜勇

来源：中国病理生理杂志, 2009, 25(05): 965-969.

DOI：10.3321/j.issn:1000-4718.2009.05.027

• 锰超氧化物歧化酶
• 启动子
• 基因,报告

目的:克隆小鼠锰超氧化物歧化酶基因(MnSOD,SOD2)5非编码区启动子序列,通过报告基因技术检测在静息或脂多糖(LPS)、亚砷酸钠(NaAsO2)等刺激下该段启动子的转录活性。方法:提取小鼠肝组织基因组DNA,PCR扩增小鼠SOD2启动子序列(-1554～+48);采用基因重组技术构建由SOD2启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,将该载体瞬时转染小鼠胚胎成纤维细胞(MEF),荧光显微镜下观察静息或NaAsO2、LPS、佛波酯(PMA)刺激下红色荧光蛋白表达。结果:正确扩增出小鼠SOD2启动子(-1554～+48)片段;成功构建其红色荧光蛋白报告基因载体,证实该质粒转染MEF细胞后静息状态下仅可见少量而微弱的红色荧光,经NaAsO2、LPS、PMA刺激后,红色荧光强度和亮度明显增加。结论:小鼠SOD2启动子(-1554～+48)在静息状态下即具有转录活性,炎性、氧化应激刺激后SOD2表达增强;该启动子的成功克隆和其报告基因载体的构建,为研究SOD2的基因表达调控机制提供了重要基础和工具。

• 出版日期2009
• 单位南方医科大学; 广东医科大学