腺病毒介导的shRNA下调PTEN表达对活化肝星状细胞骨架蛋白F-actin的影响

作者：郝礼森; 宋小杰; 章广玲; 王静; 刘博; 张朋垒; 张明婷; 靳丽敏

来源：中国病理生理杂志, 2017, 33(03): 557-561+566.

• PTEN
• RNA干扰
• 肝星状细胞
• 细胞骨架
• 纤丝状肌动蛋白

目的:探讨腺病毒介导的shRNA下调第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物（PTEN）基因表达对体外培养的活化肝星状细胞（HSC）纤丝状肌动蛋白（F-actin）的影响。方法:体外培养大鼠活化HSC（HSCT6）,将携带靶向PTEN的RNA干扰序列[短发夹RNA（shRNA）]并表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组腺病毒AdshRNA/PTEN及仅表达GFP的对照空病毒Ad-GFP转染HSC,实时荧光定量PCR及Western blotting实验检测HSC的PTEN mRNA及蛋白表达;利用激光扫描共聚焦显微镜检测HSC的形态、F-actin的分布及荧光强度、伪足以及应力纤维的变化,并采用钙荧光探针Rhod-2/AM负载检测HSC内Ca2+浓度的变化。实验分为对照（control）组（在腺病毒转染步骤以DMEM代替腺病毒液）、Ad-GFP组（转染表达GFP的空病毒Ad-GFP）和Ad-shRNA/PTEN组（转染重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN）。结果:靶向PTEN的shRNA成功转染体外活化HSC,显著下调HSC的PTEN mRNA及蛋白表达（P<0.05）;PTEN表达下调使活化HSC呈星形向四周伸展,F-actin排列紧密规则,数量增多,伪足充分向外伸展,应力纤维丝增长增粗;Ad-shRNA/PTEN组F-actin的荧光强度较control组及Ad-GFP组显著增强（P<0.05）,而control组与Ad-GFP组间差异无统计学显著性;Ad-shRNA/PTEN组HSC内Ca2+浓度较control组及Ad-GFP组明显升高（P<0.05）,而control组与Ad-GFP组间差异无统计学显著性。结论:PTEN表达下调使体外活化肝星状细胞骨架蛋白F-actin的形成及细胞骨架的重构增强,并增加了HSC内的Ca2浓度。

• 出版日期2017
• 单位基础医学院; 华北理工大学