小鼠肝脏原位持续灌流方法的建立及其在肝脏非实质细胞分离中的应用

作者：姚一楠; 卢珊; 李和权; 周建英

来源：中国药理学通报, 2012, 28(10): 1475-1477.

• 原位肝灌流
• 肝脏非实质细胞
• 胶原酶
• 小鼠
• 孵育
• Percoll液

目的建立一种小鼠肝脏原位持续灌流的方法,并将该法应用于肝脏非实质细胞的分离。方法利用三通管和静脉留置针将门静脉、蠕动泵软管以及下腔静脉连接形成封闭回路,自门静脉端注入37℃的胶原酶消化液约60 ml,调节蠕动泵转速为20 ml.min-1行循环灌注约30 min,摘除肝脏剪切成小块组织,加入胶原酶孵育液消化30 min后碾碎制备成细胞悬液,离心后取沉淀先后以50%和35%的Per-coll密度离心即可获得小鼠肝非实质细胞。结果肝脏非实质细胞的得率为0.5×107～1×107个/鼠肝,流式检测CD45+细胞占(27.21±1.47)%。结论胶原酶肝脏原位持续灌流+体外孵育消化结合Percoll密度离心是分离小鼠肝脏非实质细胞的可靠方法。

• 出版日期2012
• 单位浙江大学医学院附属第一医院