Bloom解旋酶突变体的克隆与表达

作者：张金彪; 许厚强; 骆衡; 许庆贺; 陈祥; 李坤

来源：生物技术通报, 2013, (01): 123-128.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2013.01.013

• BLM解旋酶
• 重组PCR
• 多位点突变
• 基因克隆表达 BLM helicase Recombinant PCR Multisite mutation Gene cloning and expressing

blm基因的突变可导致Bloom综合症(BS),Bloom综合症是一种罕见隐性常染色体遗传疾病,患者遗传不稳定并易患多种类型癌症。临床发现BS患者细胞中的BLM的RecQ-Ct区域的1 036位半胱氨酸残基发生突变。运用生物信息学及分子生物学技术,通过两轮重组PCR,构建985位和1 036位氨基酸突变的BLM解旋酶多点突变基因,克隆到载体pET-28a中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。分离纯化获得了高纯度(>95%)的双突变型BLM解旋酶,并对其进行了Western blotting鉴定。这些结果可为进一步研究BS的致病机制奠定基础。

• 出版日期2013
• 单位动物科学学院; 生命科学学院; 贵州大学