重组腺病毒载体vAd-tat的构建及其在细胞中的表达

作者：王路; 白雪; 刘红亮; 张高红; 郑永唐

来源：免疫学杂志, 2009, (02): 168-172.

• HIV-1
• tat
• 293细胞
• 腺病毒
• 基因克隆 HIV-1
• tat
• 293 cell
• adenovirus
• gene cloning

目的构建含HIV-1tat基因重组腺病毒,观察在不同细胞中外源蛋白Tat的表达,作为DC抗HIV疫苗的基础。方法通过PCR扩增,获得HXB2tat的cDNA片段,定向克隆入腺病毒转移载体pTrack-CMV,线性化后转化含有腺病毒骨架pAd-easy-1的大肠杆菌BJ5183,获得同源重组的质粒prAd-tat,PacⅠ酶切纯化后转染293细胞,包装成具有感染力的复制缺陷型重组腺病毒vAd-tat。结果经PCR、酶切及DNA序列测定,插入片段大小、方向正确,获得具有感染力的含有HIV-1tat基因的重组腺病毒;通过Western blot方法检测,重组腺病毒在293细胞中表达出Mr为15000...

• 出版日期2009
• 单位中国科学院昆明动物研究所; 中国科学院大学