摘要

目的 观察乔松素(PIN)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠心肌细胞焦亡的预防作用,并探讨其预防作用机制。方法 将大鼠心肌细胞H9c2分为PIN-H+740-Y-P组、PIN-H组、PIN-L组、模型组、对照组。PIN-H+740-Y-P组用加入25μmol/L PIN+50μg/mL 740-Y-P的培养基、PIN-H组用加入25μmol/L PIN的培养基、PIN-L组用加入12.5μmol/L PIN的培养基、模型组用空白培养基培养1 h之后进行H/R处理。对照组仅用空白培养基培养。取上述各组细胞继续培养24、48、72 h,采用CCK-8法测定细胞活力;取上述各组细胞,采用碘化吡啶(PI)染色法测算各组心肌细胞焦亡比例,ELISA法测定细胞中LDH,Western blotting法检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、核因子-κB(NF-κB)蛋白和细胞焦亡相关蛋白(Caspase-1、ASC和NLRP3蛋白),荧光定量PCR法测定细胞中PI3K、AKT、NF-κB mRNA。结果 与对照组相比,模型组细胞活力(48 h、72 h)下降(P均<0.05);焦亡心肌细胞比例,LDH水平,Caspase-1、ASC和NLRP3蛋白相对表达量,PI3K、Akt、NF-κB p65蛋白的磷酸化水平及PI3K、Akt、NF-κB mRNA相对表达量升高(P均<0.05)。与模型组相比,PIN-H组细胞活力(48 h、72 h)上升(P均<0.05);心肌细胞焦亡比例,LDH水平,Caspase-1、ASC和NLRP3蛋白相对表达量,PI3K、Akt、NF-κB p65蛋白的磷酸化水平及PI3K、Akt、NF-κB mRNA相对表达量下降(P均<0.05)。与PIN-H组比较,PIN-H+740-Y-P组细胞活力降低,心肌细胞焦亡比例,LDH水平,Caspase-1、ASC、NLRP3蛋白相对表达量,PI3K、AKT、NF-κB p65蛋白磷酸化水平及PI3K、AKT和NF-κB mRNA相对表达量升高(P均<0.05)。结论 PIN对H/R诱导的心肌细胞焦亡有预防作用,其作用机制可能是通过下调PI3K/AKT/NF-κB信号通路实现。