禽圆环病毒2型微滴式数字PCR定量检测方法的建立及应用

作者：张艳芳; 谢芝勋^*; 谢志勤; 张民秀; 曾婷婷; 邓显文; 罗思思; 谢丽基; 黄娇玲; 李孟

来源：中国兽医科学, 2022, 52(08): 964-969.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0156

• 禽圆环病毒2型
• 微滴式数字PCR
• 敏感性
• 特异性
• ddPCR

为建立一种可定量检测禽圆环病毒2型（AGV2）的微滴式数字PCR(ddPCR）新型检测方法，根据GenBank中AGV2的VP2基因保守序列设计了特异性探针和引物，优化不同探针引物浓度组合和退火温度梯度，通过使用该方法与荧光定量PCR(qPCR)和普通PCR方法进行灵敏度比较，同时对其他常见禽病病原体进行检测，并对40份棉拭子临床样品进行检测，评估了该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示，该方法最佳引物浓度均为900 nmol/L，最佳探针浓度为500 nmol/L，最佳退火温度为54.0℃；灵敏度低至3.2copies/μL，是q PCR和普通PCR的10倍和100倍；其他常见禽病病原体检测结果均为阴性；40份临床样品的ddPCR检测结果与qPCR检测结果一致；批内和批间重复性较好，变异系数小。结果表明，本研究所建立的微滴式数字PCR方法具有更高的敏感性和准确性，可成功运用于快速定量检测AGV2感染。

• 出版日期2022
• 单位广西壮族自治区兽医研究所