牛分枝杆菌重组蛋白TB27.4的表达、纯化及活性鉴定

作者：高新桃; 李平俊; 鑫婷; 贾红; 郭晓宇; 张改梅; 李明; 刘淑清; 朱鸿飞; 许雷

来源：中国畜牧兽医, 2014, (08): 61-65.

• 牛分枝杆菌
• TB27.4
• 表达
• 纯化
• 活性鉴定 Mycobacterium bovis
• TB27.4
• expression
• purification
• activity identification

为探索TB27.4蛋白在牛结核病鉴别诊断中的作用,本试验以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板,PCR扩增tb27.4全长基因片段,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组质粒pET-TB27.4,优化原核表达条件,并用AKTA Purifier对蛋白的纯化条件进行优化。SDS-PAGE结果显示重组蛋白为可溶性表达,且大小与理论值相符,用牛分枝杆菌阳性血清进行Western blotting检测有特异性条带,且可特异性地刺激牛分枝杆菌感染牛外周血淋巴细胞释放大量IFN-γ。结果表明,重组蛋白TB27.4具有良好的B细胞活性和T细胞刺激活性,为进一步研究其在牛结核病诊断...

• 出版日期2014
• 单位中国农业科学院北京畜牧兽医研究所; 中国农业科学院研究生院