绵羊Izumo2 cDNA的克隆及原核表达

作者：丹彤; 周晓婷; 王耀新; 邢万金

来源：内蒙古大学学报(自然科学版), 2015, 46(05): 500-505.

DOI：10.13484/j.nmgdxxbzk.20150509

• 绵羊
• IZUMO2
• cDNA克隆
• 原核表达

克隆绵羊Izumo2cDNA片段后原核表达并纯化GST-IZUMO2融合蛋白,为下一步研究IZUMO2在睾丸和精子上的定位及与其它精卵融合相关蛋白的相互作用奠定基础.以绵羊睾丸组织总cDNA为模板,根据GenBank序列(XM004015399.1)设计引物克隆绵羊Izumo2cDNA,全长为813bp,构建原核表达质粒pGEX-Izumo2,转化E.coli BL21(DE3)感受态菌,用IPTG诱导表达,并采用SDS-PAGE切胶纯化法纯化GST-IZUMO2融合蛋白,用Western-blot鉴定所得融合蛋白.克隆了813bp的绵羊Izumo2cDNA片段,其中编码区为666bp,BLAST结果显示其与GenBank数据库中的绵羊预测序列相似度为99%,并在E.coli BL21(DE3)中成功诱导表达了分子量约为50kD的GST-IZUMO2融合蛋白,为制备抗绵羊IZUMO2蛋白的抗体和进一步研究IZUMO2在绵羊睾丸中的分布和功能奠定了基础.

• 出版日期2015
• 单位生命科学学院; 内蒙古大学