牛Klf4基因重组反转录病毒载体的构建及产毒细胞株的建立

作者：辛晓玲; 吕长荣; 陈冬梅; 窦忠英

来源：畜牧兽医学报, 2010, (12): 1636-1641.

• 牛
• Klf4基因
• iPS细胞
• 反转录病毒载体 bovine
• Klf4 gene
• iPS cells
• retrovirus vector

为了克隆牛Klf4基因并构建重组反转录病毒载体,得到稳定的产毒细胞株,本研究设计了带有酶切位点的一对引物,以接触抑制生长状态的MDBK细胞为材料,用RT-PCR方法克隆出牛Klf4基因的开放阅读框序列,将之插入干细胞反转录病毒载体pMSCVneo构成真核表达载体pMSCV-Klf4;采用脂质体法将pMSCV-Klf4转染包装细胞PT67,通过G418筛选得到稳定的产毒细胞株,电镜观察培养液上清中的病毒颗粒,同时病毒感染NIH3T3细胞测定其病毒滴度。结果表明,本研究克隆的牛Klf4基因开放阅读框序列与已发表序列(NM-001105385)比对有99.9%的高同源性;构建的重组载体质粒可正常包装...

• 出版日期2010
• 单位河南省农业科学院; 西北农林科技大学