K562细胞中DNMT1与SHP-1启动子2甲基化关系的研究

作者：刘学东; 刘晓; 郭秀芬; 罗建民; 李英华

来源：中国实验血液学杂志, 2018, 26(02): 401-406.

• SHP-1
• DNMT1
• K562细胞
• 启动子甲基化

目的:探讨慢性髓系白血病(CML)急变细胞系K562细胞中DNA甲基转移酶1(DNMT1)与造血细胞磷酸酶(SHP-1)基因表达及其启动子2的甲基化状态的关系。方法:分析NCBI数据库中SHP-1基因启动子2启动子区序列。将携带DNMT1sh RNA的psi HIV-m U6-sh DNMT1和樱桃色荧光蛋白(mcherry FP)psi HIV-m U6-control的慢病毒干扰载体感染K562细胞系。应用甲基化特异的聚合酶链反应(MSP)和亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP)检测K562细胞中SHP-1基因启动子2的甲基化状态,Western blot检测SHP-1、DNMT1蛋白的表达水平,SYBR Green荧光定量PCR检测SHP-1 m RNA的表达。结果:SHP-1基因启动子2在-353 bp-+182 bp区有22个Cp G岛,K562细胞中SHP-1基因启动子2异常高甲基化且SHP-1蛋白表达缺失。K562细胞转染psi HIV-m U6-sh DNM T1后DNM T1表达水平为0.48±0.06,较转染psi HIV-m U6-control组明显降低(1.33±0.19)(t=4.18,P=0.014)。K562细胞中SHP-1蛋白表达缺失,转染psi HIV-m U6-sh DNM T1后K562细胞SHP-1蛋白恢复表达,转染psi HIV-m U6-sh DNM T1的K562细胞中SHP-1 m RNA相对表达水平(14.23±3.83)较转染psi HIV-m U6-control组(1.031±0.156)高(P=0.004)。DNMT1基因沉默后SHP-1基因启动子2中Cp G岛去甲基化。结论:K562细胞中DNMT1与SHP-1启动子2的异常甲基化及沉默相关。

• 出版日期2018
• 单位河北医科大学第二医院