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摘要
实时定量RT-PCR(qRT-PCR)技术现已发展成为基因表达分析的首选方法,然而为了得到精确和可靠的qRT-PCR分析结果,需要应用稳定表达的内参基因对样品进行校正。以粳稻‘武运粳7号’和籼稻‘明恢63’的颖花为试验材料,应用geNorm算法对6个常用的内参基因(ACT1、eEF1-α、β-TUB、UBQ5、GAPDH和UBC)在颖花开放过程中的表达稳定性进行分析。结果发现:eEF1-α和β-TUB在‘武运粳7号’颖花样品中的表达最为稳定,UBC和GAPDH在‘明恢63’颖花样品中的表达最为稳定,而ACT1在2个品种的颖花样品中表达均最不稳定。此外,同时选取2个最稳定表达的内参基因作内参照可获得更精确的校准。分析不同内参基因对JA生物合成关键基因OsAOC表达定量的影响。OsAOC表达的相对定量会随所选内参基因的不同而发生变异,进一步强调选择合适的内参基因进行校准是获得可靠qRT-PCR结果的重要前提。
