血红素加氧酶-1融合蛋白PEP-1-HO-1的制备及在大鼠H9c2心肌细胞的转导

作者：颜学滔; 王焱林; 王家宁; 王成夭; 何祥虎

来源：武汉大学学报(医学版), 2010, (04): 421-425.

DOI：10.14188/j.1671-8852.2010.04.001

• 血红素加氧酶-1
• PEP-1肽
• 融合蛋白
• 蛋白转导
• H9c2细胞 Heme Oxygenase-1
• PEP-1
• Fusion protein
• Protein transduction
• H9c2 Cardiomyocytes

目的:制备血红素加氧酶-1(HO-1)融合蛋白PEP-1-HO-1,观察融合蛋白在大鼠H9c2心肌细胞的转导。方法:设计合成hHO-1 PCR引物,扩增hHO-1 cDNA片段;采用PCR靶向克隆法将扩增产物与含有相同酶切位点载体质粒pET15b-PEP-1进行重组,扩增质粒,双酶切鉴定和DNA测序;将测序和鉴定结果正确的重组质粒转化宿主菌Rosetta(DE3)pLysS,诱导表达融合蛋白PEP-1-HO-1,利用表达蛋白N端的组氨酸"标签"(His-tag)进行亲和层析纯化融合蛋白;SDS-PAGE和Western blotting对融合蛋白进行定性检测,Bradford法定量检测纯化后蛋...

• 出版日期2010
• 单位武汉大学中南医院; 湖北医药学院