利用epiCRISPR载体表达双sgRNA实现高效的HDAC基因编辑

作者：王子实; 李苗苗; 王永明^*

来源：复旦学报(自然科学版), 2018, 57(04): 412-421.

DOI：10.15943/j.cnki.fdxb-jns.2018.04.002

• CRISPR/Cas9
• 基因敲除
• epiCRISPR
• 双gRNA
• 组蛋白去乙酰化酶
• 纯合敲除致死基因

CRISPR/Cas9技术是广泛使用的一种基因编辑技术,它包括Cas9和gRNA 2个元件.具有内切酶活性的Cas9能够通过gRNA识别并切断目标DNA序列.细胞主要通过非同源末端连接途径修复DNA,这是一个容易产生indel的修复途径,理论上有近2/3概率产生移码突变,可以用于基因敲除.很多癌细胞系和体外培养的细胞系基因拷贝数增加了,同时敲除所有拷贝的难度增大,因此有必要开发一种高效的基因敲除方法.本实验室在前期工作中利用附着体载体表达的Cas9和gRNA,可以高效地产生indel,称为epiCRISPR系统.在本研究中,我们用epiCRISPR系统同时表达2个gRNA,可以在目标基因上删除一段DNA序列,其长度不是3的倍数,这样可以高效地产生移码突变.HDAC(histone deacetylase)基因家族编码一类负责组蛋白去乙酰化的蛋白酶,对细胞生长有重要影响,敲除难度较大.我们利用附着体载体表达双gRNA的技术成功地得到了HDAC1、HDAC2和HDAC6纯合敲除细胞系.

• 出版日期2018
• 单位复旦大学; 生命科学学院