Smad3通过p38/MAPK信号通路调控细胞自噬及凋亡促进胰腺癌进程

作者：张旭东; 刘浩昂; 王志浩; 兰凯; 陈蕊; 李凯; 刘树义; Rajiv Kumar JHA^*

来源：陆军军医大学学报, 2022, 44(19): 1968-1978.

DOI：10.16016/j.2097-0927.202205059

• Smad3
• 胰腺癌
• 细胞凋亡
• 自噬

目的 观察Smad3对胰腺癌细胞Panc-1、BxPC-3凋亡、自噬的影响，初步探讨Smad3表达水平影响胰腺癌进程的可能机制。方法 基于GEPIA2数据库进行生物信息学分析，探究Smad3与胰腺癌发生、发展及生存的相关性。利用CRISPR/Cas9系统以及短发卡RNA(ShRNA)敲除及敲减Smad3的表达，采用Real-Time quantitative PCR(qPCR)和Western blot检测细胞中Smad3 mRNA和蛋白水平变化。实验组转入ShSmad3-1、ShSmad3-2序列，将不靶向任何基因的Sh-Scramble序列作为对照组(Scr)。将转入Smad3 guide RNA(gRNA)序列作为CRISPR/Cas9的实验组，转入空载质粒的作为CRISPR/Cas9的对照组。采用Western blot检测细胞中LC3、p62、p38以及p-p38蛋白变化情况，同时在敲减Smad3的胰腺癌细胞用PI-Annexin V试剂盒染色并进行流式分析。利用pLVX-Smad3质粒进行回补实验，并用p38抑制剂SB203580处理细胞检测相关蛋白的变化情况。结果 GEPIA2数据库及临床标本分析结果显示，Smad3在胰腺癌组织中高表达(P<0.05)。在胰腺癌细胞BxPC-3中转入ShSmad3-1、ShSmad3-2后，Smad3的mRNA和蛋白水平均显著降低(P<0.05)。同时在Panc-1中转入Smad3 guide RNA筛选到2个Smad3敲除细胞系。与对照组相比，敲减Smad3胰腺癌细胞凋亡显著增加(P<0.05)。Western blot实验发现：Smad3敲减及敲除后，p-p38的蛋白水平显著增加(P<0.05),LC3、p62水平显著降低(P<0.05)。进一步通过回补实验及利用SB203580处理胰腺癌细胞，发现p62、LC3蛋白水平能回复(P<0.01)。结论 干扰Smad3促进胰腺癌细胞过度自噬，进而导致细胞凋亡增加，可能与激活p38/MAPK信号通路有关。

• 出版日期2022
• 单位西安医学院; 西安医学院第一附属医院