大肠杆菌碱性磷酸酶的体外定向进化研究

作者：徐卉芳; 张先恩; 张治平; 张用梅; A.E.G.CASS

来源：生物化学与生物物理进展, 2003, (01): 89-94.

• 定向进化
• 易错聚合酶链反应
• 大肠杆菌碱性磷酸酶
• 催化活力 directed evolution
• error prone PCR
• E.coli alkaline phosphatase
• catalytic activity

大肠杆菌碱性磷酸酶 (E .colialkalinephosphatase,EAP ,EC 3 1 3 1)是一个非特异性二聚体磷酸单酯酶 .采用易错聚合酶链反应 (errorpronePCR)的方法 ,在原有高活力突变株的基础上 ,对EAP远离活性中心催化三联体的区域进行定向进化 ,经两轮errorpronePCR ,获得催化活力较亲本D10 1S突变株提高 3倍、较野生型酶提高 35倍的进化酶 4 186 ,并对该酶的催化动力学特征进行了分析 .进化酶基因的DNA测序表明 4 186含两个有义氨基酸置换 :K16 7R和S374C ,二者既不位于底物结合位点 ,也不位于酶的金属离子结合位点...

• 出版日期2003
• 单位中国科学院武汉病毒研究所; 中国科学院微生物研究所