叶酸修饰的克班宁聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒的制备及其体外抗肿瘤活性研究

作者：潘蕊; 张海亮; 赵笑雨; 唐钧泽; 吴健铭; 郑永仁; 程欣^*

来源：中草药, 2023, 54(20): 6643-6656.

DOI：10.7501/j.issn.0253-2670.2023.20.009

• 叶酸
• 聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸
• 克班宁
• 纳米粒
• 抗肿瘤活性
• 体外释放
• 超声乳化-溶剂挥发法

目的 制备叶酸修饰的克班宁聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒（folic acid modified crebanine polyethylene glycol-polylactic acid hydroxyacetic acid copolymer nanoparticles,FA-Cre@PEG-PLGA NPs），并考察其体外释放及抗肿瘤活性。方法 以克班宁为模型药，用PEG-PLGA共聚物、叶酸等为材料，通过超声乳化-溶剂挥发法制备FA-Cre@PEG-PLGA NPs，采用激光粒度仪、透射电子显微镜和荧光显微镜对FA-Cre@PEG-PLGA NPs的粒径、ζ电位及形态进行表征，紫外光谱法测定并计算克班宁的包封率和载药量，比较FA-Cre@PEG-PLGA NPs和克班宁原料药72 h的体外释放规律，通过溶血实验考察二者生物学特性，CCK-8实验考察两者对正常肝L02细胞存活率的影响及对肝癌Bel-7402细胞体外增殖抑制作用。细胞划痕法考察纳米粒和原料药对肝癌Bel-7402细胞迁移能力的影响。荧光显微镜观察纳米粒在不同时间点对肝癌Bel-7402细胞的摄取情况。结果 FA-Cre@PEG-PLGA NPs的平均粒径为（247.67±2.49)nm，多分散指数（polydispersity index,PDI）为0.139±0.027,ζ电位为（-9.40±0.54)mV，透射电子显微镜下呈圆球状核壳结构，荧光显微镜下观察纳米粒，其气化后明场呈蓝色光点、暗场呈红色光点。FA-Cre@PEG-PLGA NPs中克班宁的包封率为83.78%，载药量为67.78%。FA-Cre@PEG-PLGA NPs与克班宁原料药体外释放均符合Ritger-Peppas模型；安全性评价结果显示，FA-Cre@PEG-PLGA NPs相比于克班宁原料药在50～300μg/m L内具有良好的生物相容性。FA-Cre@PEG-PLGA NPs对人正常肝L02细胞毒性较低，相比于克班宁原料药有一定的安全性。体外增殖抑制结果显示，两者对Bel-7402肿瘤细胞的增殖抑制率均呈现出剂量依赖性和时间依赖性，且FA-Cre@PEG-PLGA NPs联合超声辐照后对Bel-7402肝癌细胞具有更强的杀伤作用。细胞划痕实验表明，克班宁原料药、FA-Cre@PEG-PLGA NPs对Bel-7402肿瘤细胞迁移均有抑制作用，呈剂量依赖性，且纳米粒联合超声抑制细胞迁移效果更显著。细胞摄取实验表明，相同时间下超声联合纳米粒能有效增强肿瘤细胞的摄取。结论 成功制得FA-Cre@PEG-PLGA NPs，而且体外具有良好的缓释效果和抑瘤作用，为FA-Cre@PEG-PLGA NPs应用于肝癌的治疗研究提供实验依据。

• 出版日期2023
• 单位云南中医药大学