双重实时逆转录PCR检测G2、G3型轮状病毒方法的建立

作者：王云瑾; 李雄雄; 王革; 王名强; 宋宪铭; 白慕群; 傅生芳; 胡广宏; 陈汉泉; 韩平; 余黎; 周旭; 马超^*

来源：微生物学免疫学进展, 2020, 48(01): 50-55.

DOI：10.13309/j.cnki.pmi.2020.01.009

• 轮状病毒
• 实时逆转录PCR
• 体外转录

目的建立一种双重实时逆转录PCR,用于G2、G3型轮状病毒的快速检测和定量分析。方法采用G2、G3型轮状病毒VP7基因特异性引物/探针和体外转录RNAs,建立双重实时逆转录PCR,在同一反应管中同时检测G2、G3型轮状病毒VP7基因;并对该方法的灵敏度、重复性、有效性进行验证。结果双重实时逆转录PCR标准曲线R2>0.99,扩增效率在90%～110%之间。灵敏度可达101拷贝,不同浓度体外转录RNAs重复性检测CV均≤4.18%。单重和双重实时逆转录PCR均可以对G2、G3型单价样本和混合样本进行有效检测,试验内CV均≤2.08%,试验间CV均≤2.52%。单重和双重实时逆转录PCR检测同一样本时具有良好的一致性,检测结果之间差异无统计学意义(P>0.05),两种方法相关性较好(R2>0.95)。结论本方法特异、快速、灵敏且重复性好,可以在同一反应管中同时检测两种目的基因,缩短了检测周期,降低了检测成本和污染风险,为轮状病毒的分型和定量提供了更为快速、有效的检测方法。

• 出版日期2020
• 单位上海生物制品研究所有限责任公司; 兰州生物制品研究所有限责任公司