等鞭金藻的电转化体系

作者：李海东; 仝颜丽; 郑立; 王玲; 刘峰; 郑明刚

来源：海洋环境科学, 2012, (05): 677-681.

• 等鞭金藻
• 电转化
• 半致死电场强度
• 存活率
• GUS报告基因
• GUS组织化学染色
• GUS荧光定量分析 Isochysis sp.
• electroporation
• half-lethal field strength
• survival rate
• GUS reporter gene
• GUS staining
• GUS fluorescence quantitative analysis

以等鞭金藻(Isochrysis sp.CCMM5001)为材料,探索了影响其电转化的主要因素,建立了等鞭金藻电转化体系。结果表明,真空抽滤法收集藻体获得的细胞存活率明显高于离心收集法;藻体收集的最适缓冲液为1.0 mmol/L HEPES(pH7.5)(含0.5 mol/L蔗糖);相同电场强度下,对数早期的藻细胞存活率最高,早、中、晚期的半致死电场强度分别为0.82～1.63 kV/cm、0.79～1.34 kV/cm、0.54～1.18 kV/cm;最佳脉冲时间为5 ms;冰浴时间为10 min。通过电击转化法向球等鞭金藻中导入质粒pCAMBIA2301,并对转基因球等鞭金藻进行GUS组织化学染色和GUS荧光定量分析,检测pCaMV 35S启动下的GUS报告基因的表达。得到转基因球等鞭金藻的GUS活性为0.52 nmolMU/(min.mg)。通过PCR方法检测固体平板上的单藻落,结果显示转化藻株能够检测到nptII基因。本研究建立了等鞭金藻的电转化体系,为外源基因的导入及其功能的研究奠定了基础。

• 出版日期2012
• 单位国家海洋局第一海洋研究所; 青岛大学