携eGFP及表达人gp100-TCR基因的慢病毒表达载体的构建与鉴定

作者：丁洁; 王燕

来源：免疫学杂志, 2011, (02): 154-157.

DOI：10.13431/j.cnki.immunol.j.20110035

• 慢病毒表达载体
• gp100
• T-细胞抗原受体
• 绿色荧光蛋白 Lentiviral vector
• gp100
• TCR
• eGFP

目的构建携eGFP的人gp100-TCR基因慢病毒表达载体。方法应用基因重组手段,从pGCsamgp100APB质粒上扩增出人gp100-TCR片段,将其插入到pLentiLox3.7(pLL3.7)慢病毒表达载体中,同时将其U6启动子替换为EF-1a启动子,形成慢病毒表达载体pLL3.7-gp100TCR-pEf-1a。将其与包装质粒混合,采用磷酸钙转染法转染293FT细胞,包装产生慢病毒,荧光显微镜观察GFP蛋白的表达水平。检测病毒滴度。结果 PCR、酶切及测序表明慢病毒表达载体pLL3.7-gp100TCR-pEf-1a构建成功。转染后的293FT细胞在荧光显微镜观察可见强绿色荧光,形成...

• 出版日期2011
• 单位南京市疾病预防控制中心