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摘要
目的研究丹参酚酸B和山楂黄酮对游离脂肪酸诱导大鼠肝细胞脂质沉积和凋亡的作用及其机制。方法采用肝脏原位胶原酶灌注法分离大鼠原代肝细胞,油酸:棕榈酸=2:1造模。原代肝细胞和HepG2均分为正常对照组、模型组、模型+丹参酚酸B组、模型+山楂黄酮组、模型+丹参酚酸B+山楂黄酮组、模型+SP600125组、丹参酚酸B组、山楂黄酮组、丹参酚酸B+山楂黄酮组、SP600125组、DMSO对照组。游离脂肪酸刺激原代肝细胞的浓度为250μmol/L、刺激HepG2的浓度为500μmol/L;丹参酚酸B的浓度为1μmol/L;山楂黄酮的浓度为5μg/mL;SP600125的浓度为10μmol/L。观察1油红O染色:丹参酚酸B和山楂黄酮对游离脂肪酸刺激的肝细胞内脂滴变化的影响;2ELISA法:丹参酚酸B和山楂黄酮对游离脂肪酸诱导的肝细胞凋亡的影响;3高内涵筛选Hoechst33258染色:丹参酚酸B和山楂黄酮对游离脂肪酸诱导的肝细胞凋亡的影响;4Western blot:丹参酚酸B和山楂黄酮对游离脂肪酸刺激的肝细胞内p-JNK表达的影响。结果 1油红O染色显示:与正常对照组比较,游离脂肪酸作用于原代肝细胞、HepG2细胞24 h后,细胞内脂滴含量显著增加(P均<0.01)。丹参酚酸和山楂黄酮可显著减少游离脂肪酸诱导的原代肝细胞、HepG2细胞内脂滴的含量(P<0.01,P<0.05)。2ELISA检测结果:与正常对照组相比游离脂肪酸组原代肝细胞及HepG2细胞吸光值[Absorbance(A405 nm-A490nm)]显著增高,细胞凋亡明显(P均<0.01);丹参酚酸B和山楂黄酮显著抑制游离脂肪酸诱导的原代肝细胞、HepG2细胞凋亡(P均<0.01)。3高内涵筛选Hoechst33258染色:与正常对照组比较,游离脂肪酸组细胞核平均荧光强度值及凋亡率明显增高(P均<0.01)。丹参酚酸B和山楂黄酮显著降低游离脂肪酸刺激的原代肝细胞细胞核平均荧光强度值及凋亡率(P均<0.01)。HepG2细胞检测结果与原代肝细胞趋势一致。4Western blot结果:与正常对照组比较,游离脂肪酸刺激原代肝细胞24 h时可显著促进p-JNK的表达(P均<0.01)。丹参酚酸B和山楂黄酮对游离脂肪酸刺激原代肝细胞24 h时p-JNK的表达有显著抑制作用(P均<0.01)。HepG2细胞p-JNK结果与原代肝细胞趋势一致。结论 1丹参酚酸B和山楂黄酮合用能够抑制游离脂肪酸诱导的肝细胞内脂滴增加及肝细胞凋亡。2丹参酚酸B和山楂黄酮合用能够抑制游离脂肪酸诱导的肝细胞内JNK的活化。二者是丹参酚酸B和山楂黄酮合用防治非酒精性脂肪性肝炎的重要机制。
- 出版日期2016
- 单位上海中医药大学
