内蒙古白绒山羊Hairless基因实时荧光定量PCR标准质粒和标准曲线的构建

作者：吴萍; 张文广; 李金泉; 李赛明; 杨秀娟; 徐磊; 常子丽; 刘兴亮; 丽春; 刘维; 张燕军; 王志新; 张永斌

来源：中国畜牧兽医, 2010, (08): 73-78.

• 绒山羊
• Hairless基因
• Real-time PCR
• 重组质粒
• 标准曲线 Cashmere goats
• Hairless gene
• real-time PCR
• recombinant plasmid
• standard curve

根据GenBank中绵羊、牛的Hairless和β-actin基因编码区保守序列,设计特异性引物,提取皮肤组织总RNA,经反转录RT-PCR扩增,产物回收纯化后与pGM-T载体连接,转化大肠杆菌感受态细胞Top10,质粒提取后经酶切、PCR和测序鉴定,获得阳性Hairless、β-actin重组质粒;将阳性重组质粒按103～107拷贝/反应梯度稀释作为模板,进行实时荧光定量PCR,系统软件自动生成标准曲线及回归方程。结果显示,产物熔解曲线峰值单一,说明引物特异性高,且无引物二聚体;Hairless和β-actin基因标准曲线相关系数分别为r2=0.998、r2=0.999,说明线性关系好。重复...

• 出版日期2010
• 单位内蒙古农业大学