甘草酸单克隆抗体的制备与鉴定

作者：张越; 屈会化; 吴婷婷; 薛瑾; 孙晔; 孙慧; 李翼飞; 赵琰; 王庆国

来源：药物分析杂志, 2013, (05): 770-774.

DOI：10.16155/j.0254-1793.2013.05.017

• 甘草酸
• 单克隆抗体
• 制备
• 鉴定
• 杂交瘤细胞株
• 免疫亲和色谱柱
• 酶联免疫吸附法

目的:制备特异性的甘草酸(GA)单克隆抗体。方法:用合成的甘草酸-牛血清白蛋白(GA-BSA)人工抗原免疫BALB/c小鼠;待血清检测阳性后,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按10∶1的比例融合;用间接竞争ELISA法和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选;用阳性细胞株诱导制备腹水抗体;用辛酸硫酸铵法纯化抗体,并进行交叉反应检测。结果:获得了稳定分泌抗甘草酸的单克隆抗体杂交瘤细胞株GA-Mab-DF5,腹水抗体纯化后纯度达98%,回收率达80%。线性检测范围为4～64μg.mL-1,R2=0.9986,并且与BSA、明胶、胆酸、去氧胆酸、芍药苷、黄芩苷等无交叉反应。结论:成功获得能稳定分泌甘草酸单克隆抗体的杂交瘤细胞株,灵敏度、特异性均较高,为样品中甘草酸的快速微量检测及免疫亲和色谱柱制备奠定了基础。

• 出版日期2013
• 单位北京中医药大学