过表达DKK1、Sost重组腺病毒载体的构建及其对MG63细胞和相关蛋白的影响

作者：万雷; 黄宏兴; 黄红; 柴生颋; 魏合伟; 张志海; 王吉利

来源：广州中医药大学学报, 2016, 33(04): 578-584.

DOI：10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2016.04.031

• DKK1
• Sost
• 过表达基因
• 腺病毒
• MG63细胞
• 细胞培养

【目的】针对Wnt信号通路抑制因子Dickkopf(DKK)1、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)基因构建过表达重组腺病毒载体,观察其对MG63细胞和相关蛋白的影响。【方法】构建DKK1、Sost过表达重组腺病毒载体,将培养好的MG63细胞分为空白对照组、空载病毒组(NC对照组)、过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达DKK1+Sost组5组,根据组别不同分别用上述过表达重组腺病毒感染MG63细胞,观察细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、钙离子浓度和骨调节蛋白表达情况。【结果】与空白对照组比较,过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达DKK1+Sost组的细胞光密度值、ALP活性值均显著降低,而钙离子浓度显著升高,以过表达DKK1+Sost组变化最明显(P<0.01)。与空白对照组比较,过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达DKK1+Sost组的骨保护蛋白(OPG)、低密度脂蛋白受体相关蛋白(Lrp)5、骨形态发生蛋白(BMP)2、结缔组织生长因子(CTGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)2、骨桥蛋白(OPN)表达量均降低,而肿瘤坏死因子(TNF)-α表达量则升高,以过表达DKK1+Sost组变化最明显,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。【结论】过表达DKK1、Sost可降低MG63细胞增殖和ALP活性,升高钙离子浓度,对骨调节蛋白有一定影响,尤以两者同时过表达时的作用最强。

• 出版日期2016
• 单位广州中医药大学附属骨伤科医院; 广州中医药大学